İki Fare Modelinde Diyabetik Retinopatinin Karakterizasyonu ve Tek Bir Anti-Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü Enjeksiyonuna Yanıt

GÖZ HASTALIKLARI / Yazan

Tamar Azrad-Leibovich 1 2, Alon Zahavi 2 3 4, Moran Friedman Gohas 1 2, Myles Brookman 2, Orit Barinfeld 1 2, Orkun Muhsinoglu 1, Shalom Michowiz 5, Dror Fixler 6, Nitza Goldenberg-Cohen 1 7 8

1 Krieger Eye Research Laboratory, Felsenstein Medical Research Center, Petach Tikva 4941492, Israel

2 Sackler Faculty of Medicine, Tel Aviv University, Tel Aviv 6997801, Israel

3 Department of Ophthalmology, Rabin Medical Center—Beilinson Hospital, Petach Tikva 4941492, Israel

4 Laboratory of Eye Research, Felsenstein Medical Research Center, Petach Tikva 4941492, Israel

5 Department of Neurosurgery, Rabin Medical Center—Beilinson Hospital, Petach Tikva 4941492, Israel

6 Faculty of Engineering and Institute of Nanotechonology and Advanced Materials, Bar Ilan University, Ramat Gan 5200100, Israel

7 Department of Ophthalmology, Bnai Zion Medical Center of Israel, Haifa 3339419, Israel

8 Bruce and Ruth Rappaport Faculty of Medicine, Israel Institute of Technology—Technion, Haifa 3200003, Israel

* Author to whom correspondence should be addressed.

† These authors contributed equally to this work.

Uluslararası J. Mol. Bilim. 2023 , 24 (1), 324; 

https://doi.org/10.3390/ijms24010324

Başvurunun alındığı tarih: 12 Kasım 2022 / Revize: 6 Aralık 2022 / Kabul: 20 Aralık 2022 / Yayınlanma: 25 Aralık 2022

Özet

Bu çalışmada iki fare modelinde diyabetik retinopatiyi ve anti-vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) enjeksiyonuna yanıtı tanımladık. Çalışma, spontan tip 1 diyabetli (n = 30, DMT1-NOD) veya kimyasal olarak uyarılan (n = 28, streptozotosin, STZ-NOD) tip 1 diyabetli 58 transgenik, obez olmayan diyabetik (NOD) farede ve 20 transgenik diyabetli farede gerçekleştirildi. tip 2 diyabetli db/db fareleri (DMT2-db/db); 30 NOD ve 8 vahşi tip fare kontrol olarak görev yaptı. Fareler 21. günde vaskülopati, retina kalınlığı ve oksidatif stres, anjiyogenez, gliosis ve diyabette rol oynayan genlerin ekspresyonu açısından incelendi. Sağ göz, bevacizumab, ranibizumab, salin enjeksiyonundan veya herhangi bir tedavi uygulanmamasından bir hafta sonra histolojik olarak incelendi. Düz montajlar, mikroanevrizmaları ve diyabetik retinada belirgin bir neovaskülarizasyon kümesi alanını ortaya çıkardı. İmmün boyama, Müller glia’nın ve belirgin Müller hücrelerinin aktivasyonunu ortaya çıkardı. Ortalama retina kalınlığı diyabetik farelerde daha fazlaydı. DMT1-NOD farelerinde RAGE arttı ve GFAP azaldı; GFAP ve SOX-9 db/db farelerinde hafif derecede arttı. Anti-VEGF tedavisi retina kalınlığında azalmaya yol açtı. Retinalar, DMT1-NOD ve DMT2-db/db farelerinde vaskülopati ve ödem gösterdi ve DMT1-NOD farelerinde Müller glia aktivasyonu gösterdi ve anti-VEGF tedavisine bir miktar yanıt verdi. Farelerde ve insanlarda diyabetik retinopatinin benzerliği göz önüne alındığında, tip 1 ve tip 2 diyabetik fare modellerinin karşılaştırılması, yeni tedavi yöntemlerinin geliştirilmesine yardımcı olabilir.

Anahtar Kelimeler:

diyabetik retinopati ; anti-vasküler endotelyal büyüme faktörü ; neovaskülarizasyon ; transgenik fareler

1. Giriş

Diyabetik retinopati birçok faktöre bağlı olarak görme bozukluğuna ve hatta körlüğe yol açabilir [ 1 ]. Önerilen çok faktörlü altta yatan mekanizma nöronal ve vasküler hasarı içerir. Diyabetik retinadaki nörovasküler kompleksler, anatomik ve fonksiyonel bozulmaya yol açan nörokimyasal ve elektriksel değişiklikler gösterir [ 2 ]. Vasküler hasar, yüksek glikoz seviyeleri nedeniyle retina kılcal duvarının zayıflaması ve bunun sonucunda kan bileşenlerinin çevredeki boşluğa sızması sonucu oluşur, bu da retina kalınlaşmasına ve göreceli iskemiye yol açar, ardından yeni damarların proliferatif büyümesi ve maküla ödemi oluşur [3 ] .Vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), diyabetik retinopatide önemli bir patojenik faktördür ve önemli bir terapötik hedef olarak hizmet eder [ 4 ]. Proliferatif olmayan diyabetik retinopatisi olan hastalar bile maküla ödemi için anti-VEGF ajanlarının intravitreal enjeksiyonları ile tedavi edilmektedir [ 5 ]. Bu ortamda etkinliği iyi bilinen ana anti-VEGF ajanları bevacizumab (Avastin® ) , ranibizumab (Lucentis®)  ve aflibercept’tir (Eyelea®) [ 5 ].Diyabetin çeşitli fare modelleri araştırılmıştır. Birçok araştırmacı, dozajlar ve enjeksiyon sayısı açısından değişen protokollerle peritoneal streptozotosin (STZ) enjeksiyonu kullanarak kimyasal olarak insüline bağımlı diyabete benzeyen bir durumu indüklemiştir [ 6 , 7 ]. Kullanılan en yaygın transgenik mutant suş, obez olmayan diyabetik (NOD) faredir; bu fare, insülin üreten pankreatik β hücrelerinin CD4+ ve CD8+ T hücreleri tarafından otoimmün yıkımı nedeniyle kendiliğinden tip 1 diyabet (DMT1) kazanır [8 ] . Tip 2 diyabet (DMT2), leptin reseptör genindeki bir mutasyon açısından homozigot olan db/db transgenik farelerde incelenmiştir. Doyma sinyali veren bir hormon olan leptinin eksikliği, 4-8 haftalıkken obezite ve hiperglisemiye yol açar [ 9 , 10 ].Diyabetik fareler, retinal mikrodamar kaybı, azalmış retinal perfüzyon ve düzensiz fokal vasküler proliferasyon ile karakterize edilir [ 11 , 12 , 13 ]. Bu modellerde sadece birkaç çalışma diyabetik retinopatiyi araştırmıştır ve bunların sadece küçük bir azınlığı neovaskülarizasyonun gelişimine odaklanmıştır [ 9 ].Bu çalışmanın amacı, DMT1’li NOD farelerinin ve DMT2’li transgenik db/db farelerin retinasındaki klinik, histolojik ve moleküler değişiklikleri karakterize etmek ve retina ödeminin tek bir intravitreal anti-VEGF ilacı enjeksiyonuna tepkisini değerlendirmekti.

2. Sonuçlar

Çalışma tasarımının ana noktalarını gösteren bir deneysel tasarım sağlanmaktadır ( Şekil 1 ).

Şekil 1. Çalışmanın deneysel tasarımı. Fare grupları, çalışma yöntemleri ve tedaviler kısaca açıklanmaktadır.

2.1. Fundus Fotoğrafında Mikroanevrizmalar ve Floresein Anjiyografi (FA)

Mikroanevrizmalar diyabetik retinopatinin önde gelen klinik belirtecidir. Fundus fotoğraflarında ve floresan anjiyografi (FA) görüntülemede bir miktar sızıntıyla birlikte retina damarlarında kıvrımlılık dikkat çekti. Bununla birlikte, DMT1-NOD farelerinde FA’da neovaskülarizasyona dair net bir kanıt bulunmazken ( 

Şekil 2 A,B), DMT2-db/db farelerinde ( Şekil 2 C) bazı sızıntı noktaları kaydedildi .

Şekil 2. Renkli fundus fotoğrafı ve kırmızısız ve floresan anjiyografi. ( A ) DMT1-NOD fareleri. ( B ) Kontrol fareleri. Optik sinir başı siyah bir okla gösterilir. Beyaz oklar anjiyografide şüpheli sızıntıları gösterir. Kontrol diyabetik olmayan gözler normal retinal damar sistemini göstermektedir. Floresan anjiyografi. ( C ) DMT2-db/db fareleri. Hiperfloresan alanlar (kırmızı oklar) fokal vasküler sızıntıyı gösterir.

2.2. Optik Koherens Tomografi (OCT) ve Histolojik Çalışmalarda Retina Ödemi

Optik koherens tomografi (OCT), diyabetik olmayan farelere (244 mikron) kıyasla DMT1 farelerinde (320 mikron) retinanın kalınlaştığını gösterdi. Tedavi edilmemiş farelerde yapılan histolojik çalışmalar, DMT1-NOD diyabetik gruplarında orta periferde (optik sinir başından 500 mikron uzakta) ortalama retina kalınlığının 280 ± 43 µm, DMT2-db/db diyabetik grubunda 299 ± 26 µm olduğunu gösterdi ve Kontrol (diyabetik olmayan) grupta 213 ± 50 µm.

2.3. Retina Perfüzyonunda Kıvrımlılık ve Neovaskülarizasyon ve Histolojik Çalışmalar

Tüm diyabetik farelerin retinal düz yuvalarında retina damarlarında kıvrımlılık gözlendi; birinin neovaskülarizasyon kümelerinden oluşan bir alana sahip olduğu görüldü ( 

Şekil 3 A,B). 

Mikroanevrizmalar çini mürekkebi ( Şekil 3 C) ve floresan jelatin ile gösterilmiştir . Başka bir DMT2 db/db faresinde damar sızıntısı görüldü ( Şekil 3 D) ve üçüncüsünde kesit üzerine neovaskülarizasyon kaydedildi ( Şekil 3 E). Kontrol farelerinin retina damar yapısı normaldi.

Şekil 3. Düz montajlı retinalarla perfüzyon çalışmaları. ( A ) Perfüzyonsuz düz montajlı retina. İntravitreal yelpaze şeklindeki damar şişkinliği, retinal damarların patolojik proliferasyonunu düşündürür. ( B ) Floresan jel ile perfüze edilmiş düz montajlı retina, damarların kıvrımlılığını ve neovaskülarizasyon kümeleri olduğundan şüphelenilen bir alanı gösteriyor. ( C ) Hint mürekkebi ile perfüze edilmiş düz montajlı retina, retina damarlarının keselenmesini gösteriyor. Bulgular retina duvarında gevşeme ve mikroanevrizmaların olduğunu gösteriyor. Başka bir DMT2 db/db faresinde damar sızıntısı ( D ) görüldü ve kesit alma ( E ) sonrasında neovaskülarizasyon fark edildi .

2.4. AirSEM ve OCT Anjiyografi (OCTA) ile Altın Nanopartikül (GNP) Tespiti/Tespit Edilmemesi

Karanlık alan hiperspektral mikroskobu, değerlendirilen tüm farelerde altın nanoparçacıklarını (GSMH) ortaya çıkardı. Hem küre hem de çubuk şeklindeki GNP’ler dokuda tanımlanmış ancak mikro damar sisteminde spesifik olarak yerleştirilmemiştir ( Şekil 4 A,B).

Şekil 4. Hiperspektral mikroskopi. Obez olmayan, diyabetik olmayan farelere intravenöz GSMH enjekte edildi. Hiperspektral karanlık alan ×200 görüntüleme, dokudaki küresel GSMH’ları ( 

A ) ve çubuk şeklindeki GSMH’ları ( B ) gösterir ancak damar sisteminde göstermez. Hava taramalı elektron mikroskobu. GNP enjeksiyonunu takiben DMT1 faresi. Düşük büyütmeli görüntü ( C ), optik sinirin merkezde olduğu retinanın tamamını göstermektedir. ( D – G ) Hiperfloresans dokudaki hücrelerde ve GNP’lerde görülebilir ancak mikro damar sisteminde görülmez ( H ).GNP enjekte edilmiş farelerin OCTA değerlendirmesi, kan akışını veya GNP akışını ortaya çıkarmayı başaramadı ve AirSEM, GNP’leri dokuda tanımladı ancak spesifik olarak retinal kan damarlarının lümeninde tanımlayamadı ( Şekil 4 C-H).

2.5. Moleküler Analiz Üzerine GFAP ve RAGE İfadesi

Oksidatif stres, anjiyogenez, gliosis ve diyabetle ilişkili genlerin ifadesi, tüm fare grupları için Şekil 4 A-E’de gösterilmektedir. İmmünohistokimya ile gösterilen Müller glia aktivasyonunun aksine, moleküler analiz üzerine, GFAP ekspresyon seviyeleri DMT1 farelerinde önemli ölçüde azaldı (0,35 kat, p = 0,04) ve DMT2 diyabetik farelerinde istatistiksel olarak anlamlı olmayan hafif bir artış eğilimi görüldü. 1,75 kat artış kaydedildi. Vimentin seviyeleri başlangıçta kaldı ( Şekil 5A ).

Şekil 5. DMT1 farelerinde diyabetik retinanın moleküler analizi. ( 

A ) Gliosis ile ilişkili genler (GFAP ve vimentin). GFAP düzeyleri önemli ölçüde azaldı (0,35 kat, p = 0,04) ve vimentin düzeyleri başlangıçtaki seviyede kaldı. ( B ) Oksidatif stresle ilişkili genler (HO-1 ve SOD-1). HO-1’de herhangi bir değişiklik olmadan, SOD-1 seviyelerinde istatistiksel olarak anlamlı olmayan hafif bir azalma eğilimi vardı. ( C ) Diyabetle ilişkili genler (EPO, IGF-1 ve RAGE). EPO ve IGF1 başlangıçta kaldı ve 1,25 katlık RAGE artışı yönünde istatistiksel olarak anlamlı olmayan bir eğilim kaydedildi. ( D ) Anjiyojenezle ilişkili genler (VEGF-A, Flt-1 ve Flk-1). Hiçbir değişiklik kaydedilmedi. ( E ) Bu çalışmada araştırılan genlerin aşırı ve az ekspresyonunun ısı haritası. (ACTB temizlik geni olarak görev yaptı).DMT1 farelerinde, EPO ve IGF-1’in ekspresyon seviyeleri başlangıçta aynı kalırken, RAGE seviyelerinde 1,25 katlık bir artışa yönelik istatistiksel olarak anlamlı olmayan bir eğilim kaydedildi ( Şekil 4 C). Diğer oksidatif stres veya anjiyogenez genlerinde herhangi bir değişiklik tespit edilmeden, SOD1 seviyelerinde hafif bir azalmaya doğru istatistiksel olarak anlamlı olmayan bir eğilim ölçüldü.

2.6. GFAP Boyama Üzerine Müller Glia’nın Belirgin Müller Hücreleriyle Aktivasyonu

DMT1 ve DMT2 diyabetik fareler arasındaki ters GFAP ekspresyonunun aksine, GFAP ve vimentin için immün boyama, diyabetik olmayan NOD farelere kıyasla tüm DMT1 farelerin (28 STZ-NOD) retinasında Müller glia aktivasyonunu ve belirgin Müller hücrelerinin aktivasyonunu gösterdi (28 STZ-NOD). n = 7) ( Şekil 6 A,B) ancak DMT2 farelerinde değil.

Şekil 6. GFAP immünofloresan boyama ve anti-VEGF’nin intravitreal enjeksiyonuna yanıt. ( A , B ) DMT1-NOD farelerine ( B ) kıyasla kontrol farelerinde ( A ) vimentin (kırmızı) ile immünofloresan boyama . ( A1 , B1 ) DMT1-NOD farelerine ( B1 ) kıyasla kontrol farelerinde ( A1 ) GFAP (yeşil) için immünofloresan boyama . Bu bulgular hep birlikte DMT1-NOD grubunda Müller glia’nın aktivasyonunu göstermektedir. ( C – E ) Gliosiste azalma. Kontrol ve DMT1-NOD gruplarının sırasıyla tek bir salin ( C , C1 ), bevacizumab ( D , D1 ) ve ranibizumab ( E , E1 ) enjeksiyonuna tepkisi . ( F ) Kontrol ve tedavi edilmemiş diyabetik farelerde ve sağ göze tek bir bevacizumab, ranibizumab veya salin enjeksiyonu ile tedavi edilen farelerde retina kalınlığı. Bevacizumab ile tedavi edilen farelerde ortalama retina kalınlığı sağ gözde 260 + 53 µm ve sol gözde 241 ± 34 µm; ranibizumab için karşılık gelen değerler 267,5 ± 47 µm ve 223 ± 39 µm idi. Tedavi edilmemiş DMT1-NOD farelerinde retina kalınlığı 280 ± 43 µm idi; Salinle tedavi edilen NOD farelerinde 310 ± 53 µm ve sol gözde 273,6 ± 55 µm; ve diyabetik olmayan NOD farelerinde 213 ± 50 µm.

2.7. İntravitreal Anti-VEGF Enjeksiyonu Sonrası Gliosis ve Retinal Ödemin Azalması

Anti-VEGF tedavisinin etkinliği, dört eşit gruba ayrılan 28 DMT1-NOD faresinde değerlendirildi. Beş diyabetik olmayan NOD faresi kontrol olarak görev yaptı. Tek bir intravitreal anti-VEGF ajanı enjeksiyonu (yedi bevacizumab, yedi ranibizumab) ile tedavi edilen 14 DMT1 faresi, gliosisin tamamen baskılandığını gösterirken, tek bir salin enjeksiyonu ile tedavi edilen diyabetik farelerde gliosis maksimumda kaldı (Şekil 6 C-E). Diyabetik olmayan kontrol farelerindeki retina kalınlığı 223,8 ± 29,7 µm, NOD diyabetik fareleri 217,2 ± 37,2 µm ( p = 0,00) ve diyabetik db/db fareleri 299,7 ± 26,7 µm ( p = 0,00) idi. Sağ göze bevacizumab enjeksiyonunu takiben retina kalınlığı sağda 260 ± 53 µm, sol gözde ise 241 ± 34 µm olarak ölçüldü; ranibizumab enjeksiyonunu takiben retina kalınlığı 267,5 ± 47 µm ve 223 ± 39 µm; Salin enjeksiyonunu takiben değerler 310 ± 53 µm ve 273,6 ± 55 µm idi ( Şekil 6 F).

3. Tartışma

Bu çalışmada, NOD farelerinde DMT1 retinopatisinin ve db/db leptin eksikliği olan farelerde DMT2 retinopatisinin neden olduğu retinal vasküler değişiklikleri tanımladık. Retinal vaskülopati, retinal ödem ve kalınlaşmanın yanı sıra anti-VEGF enjeksiyonuna bir miktar yanıt açısından insan diyabetik retinopatisine yüksek benzerlik bulduk [ 9 ].Diyabet fare modelleriyle ilgili daha önceki çalışmalarda, neovaskülarizasyonun meydana geldiği bilinmesine rağmen varlığı tam olarak belirlenmemişti ve oranlar nispeten düşüktü [ 12 ]. Bu çalışmada gösterildiği gibi, NOD farelerinin yaklaşık %20’si tedavi olmaksızın yüksek mortaliteyle spontan hiperglisemiye yakalandığından, çok azı proliferatif diyabetik retinopatinin gelişmesine yetecek kadar uzun yaşar. Neovaskülarizasyon gelişme riskinin zamanla arttığı göz önüne alındığında [ 12 ], daha önce bildirildiği gibi [ 12 , 14 ] glikoz seviyelerinin kısmi kontrolü sağkalımı iyileştirebilir ve bu modelin daha iyi karakterizasyonuna olanak sağlayabilir [ 15 ]. Bu çalışmada FA’da neovaskülarizasyon tespit etmedik, ancak çok sayıda fareyi yakın gözlem altında kullanarak bunu db/db farelerinin düz monteli retinalarında ve histolojik kesitlerde yapabildik. NOD farelerinde spontan diyabet oranının düşük olması nedeniyle, diyabetik olmayan NOD farelerinin bir alt grubunda da diyabeti kimyasal olarak indükledik. Daha önce DMT1’in STZ indüksiyonunun, adacık yıkıcı otoimmüniteyi önlediği ve tersine çevirdiği için genç NOD farelerinde etkili olmadığı bildirilmiş olmasına rağmen [ 7 ], STZ enjeksiyonundan sonraki 5-7 gün içinde hipergliseminin (>250 mg/dL) geliştiğini bulduk. . Beklendiği gibi DMT2 tüm db/db farelerinde gelişti.Çini mürekkebi ve floresan jeli, mikrovasküler anatomik detayları FA’dan daha iyi gösterdi. Her iki yöntemi kullanarak birden fazla mikroanevrizma bulduk. DMT1-NOD ve db/db farelerinin retina damarlarında değişiklikler vardı, ancak diyabetik olmayan kontrol farelerinde değişiklik olmadı. Benzer bulgular Shaw ve ark. tarafından da rapor edilmiştir. [ 16 ] ve Terazi ve Güneş [ 17 ]. Floresan jel, Hint mürekkebine göre daha yüksek doğruluk ve daha az yapaylık ile ilişkilendirildi; bu da retinal damarların kıvrımlılığını ve fokal proliferasyon tutamlarını tanımlamamızı mümkün kıldı. Bununla birlikte, perfüze edilmemiş bir DMT1-NOD gözünden alınan yalnızca bir düz montajlı retina örneğinde neovaskülarizasyon bulundu ( Şekil 2 A). Diyabetik retinopatinin geç evrelerinin bir özelliği olan ve genellikle hayvan modellerinde gözlenmeyen, buna karşın ekstravazasyonların gözlemlenmediği neovasküler kümelerin fark edilmesi şaşırtıcıydı.GSMH’lar biyolojik olarak uyumludur ve toksik değildir ve bunların varlığı, bilgisayarlı tomografi ve pozitron emisyon tomografisi gibi görüntüleme yöntemleriyle değerlendirilebilir [ 18 ]. Oftalmolojide kullanımları pek araştırılmamıştır. Küresel (20 nm) ve çubuk şeklindeki (25 nm × 65 nm) GSMH’ları kullandık. Küresel GSMH’lar için soğurma dalga boyu spektrumu 530 nm’dir ve çubuk şeklindeki GSMH’ların yönelimine bağlıdır. Değiştirilmiş tarama parametrelerini kullanan başkaları tarafından bildirildiği gibi, GSMH’ların retinal damar sisteminde kırmızı kan hücresi akışının OCTA tespitini geliştireceğini varsaydık. Üreticinin parametrelerini insan taramaları için uyguladığımızda, hem GNP enjeksiyonu olan hem de olmayan farelerdeki retinal damar sistemini görselleştirmede başarısız olduk. Bununla birlikte, düz montajlı retinalar ve hiperspektral mikroskopi kullanarak GSMH’ları tespit edebildik ancak vasküler lümen içindeki GSMH’ları tespit edemedik veya olası vaskülopatiyi belirleyemedik. Bu aynı zamanda airSEM için de geçerliydi. Bununla birlikte, çevre dokudaki GSMH’ların tespiti, oftalmik araştırmalarda gelecekteki olası uygulamalara işaret etmektedir. Diğerleri intravenöz olarak uygulanan GNP’lerin spektral mikroskopi altında dokularda tespit edilebilir olduğunu bildirmelerine rağmen [ 19 ], ex vivo tespitin ardından veya oftalmik araştırmalarda uygulanamayan teknikleri kullanarak GNP’leri doku belirteçleri olarak kullandılar [ 20 ]. Retinal mikro damar sistemini göstermek için GSMH’ları kullanmaya yönelik in vivo bir girişim daha önce tarif edilmemiştir.Başlangıçta hiperglisemi, perisit apoptozunun yanı sıra diyabetik retinanın kan damarlarındaki endotel hücrelerinde hasara neden olur [ 2 ]. Retinal anjiyogenezde, vasküler sızıntıda ve inflamatuar reaksiyonlarda [ 2 ] önemli bir katılımcı olan Müller hücreleri, ara filamanların artan içeriğiyle kendini gösteren [ 2 ] astrogliosise maruz kalır. Hiperglisemiye, glial fibriler asit proteini (GFAP) ve vimentinin sentezini artırarak ve hipoksi ile indüklenebilir faktör (HIF)-1 gibi inflamatuar ve anjiyojenik sitokinler üreterek yanıt verirler. Buna göre, çalışmalar retina inflamasyonu, vasküler sızıntı ve neovaskülarizasyonda HIF-1’de artış olduğunu bildirmiştir [ 21 ]. HIF-1 aynı zamanda oksidatif stresle ilişkili HO-1 ve SOD1 genlerinin ekspresyon düzeyini de etkiler [ 22 ]. Ayrıca kronik hiperglisemi, ileri glikasyon son ürünlerinin (AGE’ler) ve bunların reseptörü RAGE’nin oluşumunu ve birikimini hızlandıran oksidatif stresi ve inflamasyonu artırır [ 3 ]. Bu da Müller hücrelerini VEGF sekresyonunu artırmaya teşvik eder [ 4 ]. Çalışmalar, proliferatif diyabetik retinopatili hastaların vitreus sıvısında yüksek düzeyde VEGF olduğunu bildirmiştir [ 4 ]. Bununla birlikte, kemirgen diyabet modellerinde, vitreal VEGF seviyeleri hastalığın seyri sırasında dalgalanmaktadır [ 23 ].Kemirgenlerde reaktif gliosis, esas olarak oksidatif strese ikincil olarak Müller hücreleri tarafından indüklenir [ 24 ]. Bu çalışmada, DMT1-NOD fareleri, Müller glia’nın astrosit ve Müller hücresi tarafından salgılanan GFAP tarafından immünohistolojik aktivasyonunu gösterdi, ancak moleküler analiz üzerine GFAP mRNA seviyelerinde önemli bir azalma gösterdi. Anti-VEGF uygulamasını takiben gliosis önemli ölçüde azaldı. DMT2-db/db farelerinde seviyeler stabil kaldı. Buna karşılık Masser ve ark. [ 25 ], diyabetik bir sıçan modelinde, muhtemelen modeller arasındaki genetik farklılıklar ve diyabetin başlangıcından sonraki analizin zamanlaması nedeniyle, hem histolojik hem de moleküler olarak GFAP’ta bir artış olduğunu bildirdi. Reaktif gliosis, zamansal değişikliklerin çoğunlukla ani, gecikmiş ve kronik kategorilere ayrıldığı dinamik bir süreçtir. Vázquez-Chona ve diğerleri. [ 26 ] histolojik ve moleküler GFAP sonuçlarının retina hasarından itibaren geçen süreye bağlı olarak değiştiğini bulmuşlardır.Tek bir anti-VEGF enjeksiyonuna yanıt olarak retina kalınlığında azalmaya ilişkin histolojik kanıtlardaki eğilime rağmen, retina numunelerinde VEGF mRNA seviyeleri yükselmedi. Bu tutarsızlık, (histolojik olarak tespit edilen) yukarı regülasyon mRNA ekspresyonunun azalmasına yol açtığından, dahili biyogeribildirim temelinde her incelemenin yapıldığı zamanla da açıklanabilir. Diyabetik retinopatili insanlarda vitreal VEGF seviyelerinin arttığı gösterilmiştir [ 4 ].Daha önceki bazı çalışmalardan farklı olarak çalışmamızda diyabetik farelerde retina kalınlaşması gözlendi [ 6 , 9 ]. Farelerde retina ödeminin kesin olarak belirlenmesi zordur; bu nedenle anti-VEGF’nin etkisi retina ödemi farklılıklarıyla ilişkili olarak kesin olarak değerlendirilemez. Daha uzun bir diyabet süresi daha önemli farklılıklara neden olabilir. Ancak sağ gözün anti-VEGF ile tedavisi, kontrollerle karşılaştırıldığında tedavi edilmeyen gözü etkiliyor gibi görünüyordu. Bu çapraz etki, önceki bulgulara uygun olarak ranibizumab ile bevacizumab’a göre daha güçlüydü. Genel olarak, tedavi edilen farelerin her iki gözünde de kontrol farelerine (salinle tedavi edilen ve tedavi edilmeyen) göre daha ince retinalar vardı. Tedavi edilen gözlerde bevacizumab, ranibizumab’a göre biraz daha iyi bir etkiye sahipti. Bu fenomenin nedeni belirsiz olmasına rağmen, kontrol (tedavi edilmemiş) gözlere göre gliosisin hafifletilmesinde de daha iyiydi. Ranibizumab daha küçük ve yarılanma ömrü daha kısa olan bir molekül olduğundan diğer göz üzerindeki etkisinin daha iyi olması mümkündür. Ek olarak tedavi yanıtını etkileyebilecek türe özgü bir etki de vardır [ 11 ].Diyabetik ve diyabetik olmayan NOD fareleri arasında hipoksi, inflamasyon, oksidatif stres ve apoptozda rol oynayan diğer genlerin ekspresyonunda herhangi bir fark yoktu; tek istisna, bir multiligand sinyal iletim reseptörü olan RAGE’yi kodlayan gendi. immünoglobulin süper ailesi. 

RAGE , DMT1-NOD farelerinde arttı ancak DMT2-db/db farelerinde artmadı. İnsan ve hayvan modellerinde de benzer bulgular rapor edilmiştir [ 3 , 6 , 7 , 23 ]. RAGE, nükleer faktör κB’yi aktive ederek glial ve mikroglial hücrelerde proinflamatuar sitokinlerin ve reaktif oksijen türlerinin üretimine yol açar ve diyabetik retinopatide önemli bir rol oynar [ 24 ].RAGE ve ligandlarının diyabetik retinopatideki öneminin giderek daha iyi anlaşılması, RAGE antagonistleriyle tedavinin araştırılmasına yol açmıştır [ 22 ]. Bir db/db transgenik fare modelinde yapılan bir ön çalışma [ 22 ], anti-RAGE ile tedavi edilen grubun, yavru kontrollere göre önemli ölçüde daha az perisit hayaletine ve daha iyi elektrofizyolojik sonuçlara sahip olduğunu gösterdi. Kimyasal olarak indüklenen DMT1’e sahip fare modelleri üzerinde yapılan diğer çalışmalarda, anti-RAGE tedavisi, kılcal dejenerasyon gelişimini ve nöral retinada albümin birikimini başarıyla bloke etti ancak hücreler arası adezyon molekülü (ICAM)-1’in ekspresyonunu etkilemedi [11 ] . Db/db fare modelimizde RAGE seviyelerinde değişiklik olmamasının nedeni açık değildir.Bu çalışma çeşitli sınırlamalara tabidir. Bildirilen etkiler çok hafiftir; muhtemelen farelerin yüksek glikoz değerlerine sahip olduğu ancak aynı zamanda DMT1’de yüksek mortaliteye sahip hiperglisemik olduğu kısa dönemler veya enjeksiyonu takiben uzayan ötenazi süresi nedeniyle çok hafiftir [27 ] . Ek olarak, literatürde daha önce anlatıldığı gibi [ 12 ], NOD/ShiLtJ fareleri pigment içermeyen bir albino arka planına sahiptir ve; bu nedenle FA bu grupta yeterince gerçekleştirilemez (çünkü bu çalışmadaki kontroller diyabeti olmayan NOD fareleridir). Bu nedenle, bu gruptaki retinal kan damarlarını göstermek için düz bir montajdaki Hint mürekkebi seçildi. Diğer bir sınırlama ise gliosis için iki farklı IHC boyama yönteminin gerçekleştirilmiş olmasıdır. Ancak bunlar gruplar arasındaki ince farklılıkları tanımlamak için yeterli değildi. Gelecekteki çalışmalarda bu tür farklılıkları ölçmek için immünohistokimya çalışmalarına ek olarak Western blotlama da kullanılabilir.

4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. Hayvan Modeli

Bu çalışma üniversiteye bağlı bir tıp merkezinde gerçekleştirildi. Tüm deneyler Görme ve Oftalmoloji Araştırma Derneği (ARVO) Beyanı’na uygun olarak yapıldı ve yerel Kurumsal Hayvan Araştırma Komitesi tarafından onaylandı ve izlendi. Her grupta her iki cinsiyet de eşit olarak çalışmaya dahil edildi.6 aylık seksen sekiz transgenik NOD faresi (NOD/ShiLtJ), haftalık kan şekeri seviyesi kontrolleriyle diyabet açısından izlendi. Diyabet (glikoz düzeyi >250 mg/dL), 30 farede (DMT1-NOD grubu) kendiliğinden gelişti ve 28 farede, 100 mg/kg STZ’nin intraperitoneal (IP) enjeksiyonu (Sigma-Aldrich, Steinheim, Almanya) ile indüklendi. IP ketamin (80 mg/kg)/ksilazin (4 mg/kg) (STZ-NOD grubu) ile anestezi altında 2 saatlik açlık. Spontane veya indüklenmiş diyabeti olmayan geri kalan 30 NOD faresi ve 8 vahşi tip C57/bl6 (WT) faresi kontrol olarak görev yaptı. Diyabetin başlangıcından itibaren ortalama hayatta kalma süresi 2 aydı (aralık, 1-3,5 ay). Tamamı DMT1-NOD olan ilave 40 fare, diyabet başlangıcından itibaren 4 hafta veya daha kısa sürede öldü ve hariç tutuldu.Ek olarak, 4 aylık 20 transgenik DMT2-db/db homozigot fare (C57BLKS/J-lepr 

db /lepr db ) (lütfen Profesör Hochhauser, Kardiyak Araştırma Laboratuvarı, FMRC, Rabin Kampüsü, Petach Tikva, İsrail tarafından sağlanmıştır) izlendi. diyabet başlangıcı için (glikoz düzeyi >250 mg/dL). Tekrarlanan yüksek glikoz ölçümleri >250 mg/dL, diyabetin başlangıcından 2 ay sonra kaydedildi.108 çalışma hayvanının tümü vasküler değişiklikler açısından in vivo değerlendirmelere tabi tutuldu. Farelere 5-8 aylıkken CO2 inhalasyonuyla ötenazi uygulandı . Diyabetik farelere (DMT1-NOD, STZ-NOD ve DMT2 db/db), intravitreal enjeksiyona yanıt açısından incelenenler hariç, 14 gün boyunca kontrolsüz yüksek glikoz seviyelerinin ardından ötenazi uygulandı. Retinal perfüzyon çalışmaları yapıldı ve dokular histolojik çalışmalar, hava taramalı elektron mikroskobu ve moleküler analiz için işlendi. Anti-VEGF tedavisi, kontrolsüz hipergliseminin (>250 mg/dL) başlamasından en az 4 hafta sonra DMT1-NOD farelerine uygulandı ve farelere, 1 hafta sonra histolojik ve immünofloresan değerlendirme için ötenazi uygulandı.

4.2. Retina Damar Sisteminin Klinik Değerlendirilmesi

4.2.1. Optik Koherens Tomografi (OCT)

IP ketamin (80 mg/kg)/ksilazin (4 mg/kg) ile anestezi indüklendi, ardından %0,5 tropikamid (Mydramid, Fisher Pharmaceutical Labs, Tel Aviv, İsrail) ile gözbebeği dilatasyonu yapıldı. OCT, insan kornea protokolü kullanılarak bir spektral alan sistemi (Cirrus™ OCT, versiyon 4.5.1.11 200 x 200 küp modu; Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA, ABD) ile gerçekleştirildi.

4.2.2. Floresein Anjiyografi (FA)

FA, 21 farede gerçekleştirildi: 10 DMT1-NOD faresi, 6 DMT2 db/db faresi, 3 NOD kontrolü ve 2 WT kontrolü, daha önce grubumuz tarafından tarif edildiği gibi [ 23 ]. Görüntü elde edilmeden önce 0,04 mL %25 sodyum floresein (%25 AMP; AK-Fluor, Akorn, Decatur, IL, ABD) IP olarak enjekte edildi. Renkli ve kırmızısız fundus fotoğrafçılığı ve FA, fareler için özelleştirilmiş bir plastik kontakt lens kullanılarak bir dijital fundus kamerası (TRC 50x serisi; Topcon, Farmingdale, NY, ABD) ile hemen ve 30 dakikaya kadar gerçekleştirildi.

4.3. Retina Perfüzyon Çalışmaları

Floresan jelatin ve Hindistan mürekkebi ile perfüzyon çalışmaları, 5 diyabetik DMT1-NOD faresinde ve 5 kontrolde gerçekleştirildi. Altın nanopartikülleri 7 diyabetik DMT1-NOD, 1 diyabetik olmayan NOD, 4 DMT2 db/db ve 1 WT faresine enjekte edildi.

4.3.1. Floresan Jelatin

Floresan jelatin perfüzyon yöntemi daha önce tarif edilmiştir [ 23 , 28 , 29 ]. Kısaca, fareler, IM ketamin/ksilazin infüzyonundan önce, fare artık ağrılı uyaranlara yanıt vermeyinceye kadar terminal olarak anestezi altına alındı. Farelere daha sonra 5 mL %2 jelatin ve heparin (1:5000; Bodene (Pty), Port Elizabeth, Güney Afrika), atropin sülfat (1:10.000; Teva Pharmaceuticals, Petach Tikva, İsrail) karışımı aşılandı. ve floresan-konjuge sığır serum albümini (FITC-BSA). Daha sonra farelere önceki karışımla birlikte 6 mL %4 jelatin (domuz derisinden jelatin, #G1890; Sigma, St. Louis, MO, ABD) aşılandı. Perfüzyonları pıhtılaştırmak için fareler buza yerleştirildi. Gözler daha sonra enüklee edildi ve hemen oda sıcaklığında 0,1 M fosfat tamponlu salin (PBS) içindeki %10 nötr tamponlu formalinde sabitlendi ve damar sisteminin perfüzyonu incelendi.

4.3.2. Hint mürekkebi

Hindistan mürekkebi (Higgins #4418; Sanford Corp, Bellwood, IL, ABD) derin terminal anestezisi altında sol ventriküle enjekte edildi. Bu yöntem, daha önce açıklandığı gibi retinal damar yapısının izlenmesi için iyi bir şekilde kurulmuştur [ 30 ].

4.3.3. Altın Nanopartiküller (GSMH)

GSMH’lar, İsrail’deki Bar Ilan Üniversitesi Mühendislik Fakültesi ve Nanoteknoloji ve İleri Malzemeler Enstitüsü’nde yapılan çalışma için tasarlandı ve üretildi. Fareler yukarıda detaylandırıldığı gibi anestezi altına yerleştirildi ve küre ve çubuk şeklindeki GNP’ler (100 µL, 20 µgr/mL) intravenöz olarak uygulandı. OCT anjiyografisi (OCTA) (Optovue Inc., Fremont, CA, ABD), in vivo olarak retina dolaşımındaki GNP’leri tespit etmek için kullanıldı.

4.4. Retinal Düz Montaj Çalışmaları

4.4.1. Floresan Mikroskop

Daha önce açıklandığı gibi, retinalar lamelli bir cam slayt üzerinde düzleştirilmiş bir bütün olarak hazırlandı [ 31 ]. Görüntüler, FITC-BSA (ApoTome, Carl Zeiss Microscopy, Jena, Almanya) için uygun filtreler kullanılarak bir floresan mikroskobu ile elde edildi.

4.4.2. AirSEM

4 DMT1-NOD diyabetik GNP enjekte edilmiş farenin düz montajlı retinaları, lamel olmadan yukarıdaki gibi hazırlandı ve yenilikçi bir yüksek çözünürlüklü taramalı elektron mikroskobu (B-Nano, Rehovot, İsrail’in izniyle) airSEM TM altında analiz edildi 

.

4.4.3. Hiperspektral Görüntüleme

GNP enjekte edilmiş farelerden alınan numuneler (1 NOD diyabetik olmayan, 3 DMT1-NOD diyabetik, 1 WT ve 1 DMT2-db/db fare), Cri Nuance TM 

Hiperspektral Görüntüleme Sistemi (Perkin Elmer, Hopkinton, MI) kullanılarak analiz edildi. renk kodu tablosunda görüntüleme için bir halojen ışık kaynağı (UN2-PSE100, Nikon, Tokyo, Japonya) ve 40x objektif (0,75 NA) ve 32 bit ultra duyarlı şarj bağlantılı cihaz kamera dedektörü (N-MSI-EX) kırmızı-yeşil-mavi (RGB) modu.

4.5. Histolojik Çalışmalar

4.5.1. Hematoksilen ve Eozin

Daha önce açıklandığı gibi, 10 µm kalınlığındaki sagittal kesitler hematoksilen ve eozin ile boyandı ve ışık mikroskobu altında incelendi [ 31 ]. Toplam retina kalınlığı, her bölümün çeşitli alanlarında ve her 10 slaydın 3 bölümünde (ardışık 30 bölüm), göz başına toplam 7-10 slayt olacak şekilde ölçüldü.

4.5.2. İmmün boyama

Slaytlar PBSX1 ve PBS-TWEEN 20 %0,5 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) içinde yıkandı. BSA’da inkübasyonun ardından slaytlar, aşağıdaki birincil antikorlarla gece boyunca 4 °C’de inkübe edildi: anti-GFAP (1:200,04-1062, tavşan anti-fare; Merck Millipore, Merck KgaA, Darmstadt, Almanya) veya anti-vimentin (1:500, AB-5733, tavuk anti-fare; Merck Millipore). Kesitler yıkandı ve aşağıdaki ikincil antikorlarla oda sıcaklığında 1 saat süreyle inkübe edildi: keçi anti-tavşan IgG Alexa Fluor 488 (1:200, A11008, Molecular Probes, Invitrogen, Carlsbad, CA, ABD) ve keçi anti-tavuk IgG NL -557 (1:200,NL016; Ar-Ge Sistemleri-Biotest, Minneapolis, MN, ABD). Daha sonra NucBlue (#R37605; Molecular Probes, Eugene, OR, ABD) ile boyandılar ve ProLong Gold Antifade Mountant (#P36930; Molecular Probes) ile kaplandılar. Slaytlar ışıktan korundu ve 4 °C’de tutuldu. Görüntüler, DAPI filtresi (ApoTome; Carl Zeiss Microscopy, Jena, Almanya) ile donatılmış bir floresan mikroskobu kullanılarak elde edildi.

4.6. Moleküler Analiz

15 DMT1-NOD diyabetik farenin, 9 DMT2-db/db farenin ve 15 diyabetik olmayan farenin retinaları, oksidatif stres (süperoksit dismutaz 1 ( 

SOD1) ve hem oksijenaz 1 (HO1 )), anjiyogenez (vasküler) ile ilgili genler açısından analiz edildi. endotelyal büyüme faktörü A ( VEGF-A ) , vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptörü 1 ( VEGFR-1)(Flt-1 ) ve vasküler endotelyal büyüme faktörü reseptörü 1( VEGFR-2) (Flk1 )), gliosis (glial fibriler asidik protein) ( GFAP) ve vimentin ( VIM )) ve diyabet (ileri glikasyon son ürünleri için reseptör ( RAGE), insülin benzeri büyüme faktörü-I ( IGF-1 ) ve eritropoietin ( EPO )).

Gerçek Zamanlı Kantitatif PCR (RT-qPCR)

Retinalar mikroskop altında ayrıldı, RNAlater (Invitrogen) üzerinde inkübe edildi ve -80 °C’de tutuldu. Toplam RNA, üreticinin protokolüne göre TRIzolTM reaktifi (Invitrogen) kullanılarak ekstre edildi ve daha sonra üreticinin protokolüne göre a-kapasiteli cDNA RT kiti +RNAse inhibitörü (#4374967; Applied Biosystems, Foster City, CA, ABD) kullanılarak cDNA’ya ters kopyalandı. talimatlar.CDNA sentezinin ardından ilgilenilen 10 genin mRNA’sının retinal ekspresyonu, gene spesifik primerler kullanılarak RT-qPCR ile değerlendirildi ( Tablo 1 ). Reaksiyon verimliliği, retina için standart bir eğriye karşı test edildi. Gen ekspresyonu, bir temizlik geni olan fare beta aktin’e normalleştirildi. Fast SYBR 

® Green Master Mix (4385612 Applied Biosystems, Foster City, CA) ve StepOneTM Yazılımı v2.2.2 (Applied Biosystems) kullanıldı. Reaksiyonlar, 1 uL cDNA, ileri ve geri primerlerin her birinden 10 uM/0,5 uL ve Ana Karışıma dahil edilen tamponu içeren 10 uL’lik bir hacimde gerçekleştirildi.

Döngü koşulları, 95 °C’de 20 saniye boyunca ilk denatürasyon, ardından 95 °C’de 30 saniyelik 40 döngü ve 60 °C’de 30 saniyelik tavlama ve uzatmaydı. Bireysel tüp değişkenliğini en aza indirmek amacıyla her gen için çift RT-qPCR reaksiyonları gerçekleştirildi ve her zaman noktası için bir ortalama alındı. Eşik döngüsü verimliliği düzeltmeleri hesaplandı ve her bir gen PCR tahlili için cDNA kullanılarak erime eğrileri elde edildi. Sonuçlar, karşılaştırmalı eşik döngüsü (Ct) yöntemi (2-ΔΔCt yöntemi, burada ΔΔCt = ΔCt (örnek) —ΔCt (referans gen) (DATA Assist TM Yazılımı v2.2.2, Applied Biosystems)) ile ölçüldü.

4.7. Anti-VEGF’nin İntravitreal Enjeksiyonu

Hiperglisemik DMT1-NOD fareleri, IP ketamin (80 mg/kg)/ksilazin (4 mg/kg) ve topikal oksibuprokain hidroklorür %0,4 ile anestezi altına alındı. Bevacizumab (75 µg/3 µL), ranibizumab (30 µg/3 µL) veya salin %0,9 (3 µL), Hamilton şırıngası kullanılarak sağ göze enjekte edildi. Sol göz iç kontrol görevi görüyordu.

4.8. İstatistiksel analiz

Deneysel veriler ortalama ve standart hata olarak ifade edilmiştir. Gruplar arasındaki farkların anlamlılığını belirlemek için Öğrenci 

t testi kullanıldı. P değerinin <0,05 olması anlamlı kabul edildi.

4.9. Veri ve Kaynak Kullanılabilirliği

Mevcut çalışma sırasında oluşturulan ve/veya analiz edilen veri kümeleri, makul talep üzerine ilgili yazardan temin edilebilir. Mevcut çalışma sırasında hiçbir uygulanabilir kaynak üretilmedi veya analiz edilmedi.

5. Sonuçlar

Özet olarak, diyabetik farelerin retinaları vaskülopati ve ödem ile karakterizedir. Moleküler analiz sonucunda retinal VEGF veya GFAP mRNA seviyelerinde bir artış olmamasına rağmen , DMT1’li (spontan veya STZ kaynaklı) NOD farelerinde immünofloresan çalışmaları Müller glia’nın aktivasyonunu ortaya çıkardı ve anti-VEGF tedavisine iyi bir yanıt vardı. . Bevacizumab, ranibizumab’a göre biraz daha etkiliydi. DMT2-db/db farelerinde Müller glia aktivasyonu yoktu. Modelimizde FA’da neovaskülarizasyon eksikliği, diyabet geliştikten sonra çalışma hayvanlarının ömrünün kısa olmasından kaynaklanıyor olabilir. 

GFAP, DMT1-NOD farelerinde önemli ölçüde azalan ve DMT2 db/db farelerinde hafif artan, test edilen tek diyabet geniydi. 

RAGE arttı ancak DMT1-NOD farelerinde anlamlı düzeyde olmasa da arttı. Histolojik ve moleküler bulguların karşılaştırılması ve yeni moleküler yolakların takip edilebilmesi, tedavi yöntemlerinde gelişmelere yol açabilir.

Yazar Katkıları

Kavramsallaştırma, NG-C. ve TA-L.; metodoloji, NG-C. ve DF; biçimsel analiz, NG-C., DF, TA-L., AZ, MFG, MB, OB, OM ve SM; soruşturma, NG-C., DF, TA-L., AZ, MFG, MB, OB, OM ve SM; kaynaklar, NG-C. ve DF; veri iyileştirme, NG-C., DF, TA-L., AZ, MFG, MB, OB, OM ve SM; yazma—orijinal taslak hazırlama, NG-C., DF, TA-L. ve AZ; yazma – inceleme ve düzenleme, NG-C., DF, TA-L., AZ, MFG, MB, OB, OM ve SM; denetim, NG-C.; finansman edinimi, NG-C. Tüm yazarlar yazının yayınlanmış versiyonunu okudu ve kabul etti.

Finansman

Bu çalışma ZANVYL VE ISABELLE KRIEGER FON, Baltimore, Maryland, ABD ve D-CURE, İSRAİL SAĞLIK BAKANLIĞI VE İSRAİL BİLİMSEL VAKFI, Kudüs, İsrail (hibe numarası 3-0000-11401) tarafından kısmen desteklenmiştir.

Kurumsal İnceleme Kurulu Beyanı

Hayvan çalışma protokolü, Rabin Tıp Merkezi Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylandı (protokol kodu B-022-8109-010914, 17 Eylül 2014).

Bilgilendirilmiş Onam Beyanı

Uygulanamaz.

Veri Kullanılabilirliği Beyanı

Mevcut çalışma sırasında oluşturulan ve/veya analiz edilen veri setleri, makul talep üzerine ilgili yazardan temin edilebilir. Mevcut çalışma sırasında hiçbir uygulanabilir kaynak üretilmedi veya analiz edilmedi.

Teşekkür

Yazarlar histolojik araştırmalar ve ölçümlerdeki yardımlarından dolayı Emmanuelle Jornet’e teşekkür eder. Rehovot, İsrail’deki Yüksek Çözünürlüklü Açık Hava Elektron Mikroskobu start-up şirketi B-nano’ya, retinaların nanopartiküller açısından ücretsiz analizi için teşekkür ederiz.

Çıkar çatışmaları

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan etmektedir. Fon sağlayıcıların çalışmanın tasarımında hiçbir rolü yoktu; verilerin toplanmasında, analiz edilmesinde veya yorumlanmasında; Makalenin yazımında; veya sonuçların yayınlanması kararında.

Referanslar

  1. Sobrin, L.; Yeşil, T.; Sim, X.; Jensen, RA; Tai, ES; Tay, WT; Wang, JJ; Mitchell, P.; Sandholm, N.; Liu, Y.; ve ark. Tip 2 Diyabetli Kişilerde Diyabetik Retinopatiye Yönelik Aday Gen Derneği Çalışması: Aday Gen Derneği Kaynağı (CARe). Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2011 , 52 , 7593–7602. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  2. Eleftheriou, CG; Ivanova, E.; Sagdullaev, BT Nöronlar ve perisitlerin: Diyabetik retinopatiye nöro-vasküler yaklaşım. Vis. Nörobilim. 2020 , 37 , E005. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  3. Safi, SZ; Qvist, R.; Kumar, S.; Batumalaie, K.; İsmail, ISB Diyabetik Retinopatinin Moleküler Mekanizmaları, Genel Önleyici Stratejiler ve Yeni Tedavi Hedefleri. BioMed Arş. Uluslararası 2014 , 2014 , 801269. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ] [ Yeşil Versiyon ]
  4. Osaadon, P.; Fagan, XJ; Lifshitz, T.; Levy, J. Proliferatif diyabetik retinopati için anti-VEGF ajanlarının gözden geçirilmesi. Göz 2014 , 28 , 510–520. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  5. Calvo, P.; Abadia, B.; Ferreras, A.; Ruiz-Moreno, O.; Yeşiller, G.; Pablo, LE Diyabetik Maküla Ödemi: Yardımcı Tedavi Seçenekleri. İlaçlar 2015 , 75 , 1461–1469. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  6. Stahl, A.; Connor, K.; Sapieha, P.; Chen, J.; Dennison, RJ; Krah, NM; Denize doğru, MR; Willett, KL; Aderman, CM; Guerin, KI; ve ark. Anjiyogenez Modeli Olarak Fare Retinası. Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2010 , 51 , 2813–2826. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  7. Tapu, MC; Anderson, JM; Armstrong, AS; A Gastineau, D.; Hiddinga, HJ; Cihangir, A.; Eberhardt, NL; Kudva, YC Tek doz streptozotosin kaynaklı diyabet: Adacık transplantasyon modellerinde çalışma tasarımına ilişkin hususlar. Laboratuar. Animasyon. 2011 , 45 , 131–140. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  8. Makino, S.; Kunimoto, K.; Muraoka, Y.; Mizushima, Y.; Katagiri, K.; Tochino, Y. Obez Olmayan, Diyabetik Fare Suşunun Islahı. Tecrübe. Animasyon. 1980 , 29 , 1–13. [ Google Akademik ] [ CrossRef _
  9. Lai, AKW; Lo, Diyabetik Retinopatinin ACY Hayvan Modelleri: Özet ve Karşılaştırma. J. Diyabet Arş. 2013 , 2013 , 106594. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  10. Bogdanov, P.; Corraliza, L.; A Villena, J.; Carvalho, AR; Garcia-Arumi, J.; Ramos, D.; Ruberte, J.; Simó, R.; Hernández, C. db/db Fare: Diyabetik Retina Nörodejenerasyonunun Çalışması için Yararlı Bir Model. PLoS ONE 2014 , 9 , e97302. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  11. Yu, L.; Wu, X.; Cheng, Z.; Lee, CV; LeCouter, J.; Campa, C.; Fuh, G.; Lowman, H.; Ferrara, N. Bevacizumab ve Murin VEGF-A Arasındaki Etkileşim: Yeniden Değerlendirme. Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2008 , 49 , 522–527. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  12. Robinson, R.; Barathi, Virginia; Chaurasia, S.; Wong, TY; Kern, TS Diyabetik retinopatinin hayvan modellerine ilişkin güncelleme: Moleküler yaklaşımlardan farelere ve daha yüksek memelilere. Dis. Modeli. Mekanik 2012 , 5 , 444–456. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  13. Lee, VK; Hosking, BM; Holeniewska, J.; Kubala, EC; von Leithner, PL; Gardner, PJ; Foxton, RH; Shima, DT BTBR ob/ob tip 2 diyabet fare modeli, erken retina fonksiyonu kaybı ve retina iltihabı ve ardından geç vasküler değişiklikler sergiler. Diabetologia 2018 , 61 , 2422–2432. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ] [ Yeşil Versiyon ]
  14. Yariv, İ.; Rahamim, G.; Shliselberg, E.; Duadi, H.; Lipovsky, A.; Lubart, R.; Fixler, D. Optik yinelemeli bir teknik kullanılarak dokudaki nanopartiküllerin tespit edilmesi. Biyomed. Opsiyonel Ekspres 2014 , 5 , 3871–3881. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  15. Fixler, D.; Nayhoz, T.; Ray, K. Katı Fantomlardaki Florofor-Konjuge Altın Nanopartiküllerin veya Nanoçubukların Difüzyon Yansıması ve Floresan Ömür Boyu Görüntüleme Mikroskobu Çalışması. ACS Foton 2014 , 1 , 900–905. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ] [ Yeşil Versiyon ]
  16. Wylęgała, A.; Teper, S.; Dobrowolski, D.; Wylęgała, E. Optik tutarlılık anjiyografi. Tıp 2016 , 95 , e4907. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ]
  17. Lin, M.; Chen, Y.; Jin, J.; Hu, Y.; Zhou, K.; Zhu, M.; Le, Y.-Z.; Ge, J.; Johnson, R.; Ma, J.-X. Retinal Müller hücrelerinde hipoksi ile indüklenebilir faktör-1’in koşullu nakavt edildiği farelerde iskemi kaynaklı retinal neovaskülarizasyon ve diyabetik retinopati. Diabetologia 2011 , 54 , 1554–1566. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  18. Barile, GR; Pachydaki, SI; Tari, SR; Lee, SE; Donmoyer, CM; Ma, W.; Rong, LL; Buciarelli, LG; Wendt, T.; Horig, H.; ve ark. Erken Diyabetik Retinopatide RAGE Ekseni. Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2005 , 46 , 2916–2924. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  19. Villacampa, P.; Ribera, A.; Motaş, S.; Ramírez, L.; Garcia, M.; de la Villa, P.; Haurigot, Virginia; Bosch, F. İnsülin benzeri Büyüme Faktörü I (IGF-I) kaynaklı Kronik Gliosis ve Retinal Stres, Retinopatinin Fare Modelinde Nörodejenerasyona Yol Açıyor. J. Biol. Kimya 2013 , 288 , 17631–17642. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  20. Hippert, C.; Graca, AB; Berber, AC; Batı, E.; Smith, AJ; Ali, R.; Pearson, RA Kalıtsal Retinal Dejenerasyona Yanıt Olarak Müller Glia Aktivasyonu Oldukça Çeşitlidir ve Hastalığa Özeldir. PLoS ONE 2015 , 10 , e0120415. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  21. Masser, DR; Starkey, HDV; Bixler, GV; Dunton, W.; Bronson, SK; Freeman, WM İnsülin tedavisi, diyabetik sıçanlarda retinal nöroenflamasyonu normalleştirir ancak sinaps kaybının belirteçlerini normalleştirmez. Tecrübe. Göz Arş. 2014 , 125 , 95–106. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ] [ Yeşil Versiyon ]
  22. Vázquez-Chona, FR; Swan, A.; Ferrell, WD; Jiang, L.; Baehr, W.; Chien, W.-M.; Fero, M.; E Marc, R.; Levine, EM Proliferatif reaktif gliosis, glial metabolik destek ve nöronal fonksiyonla uyumludur. BMC Nörobilim. 2011 , 12 , 98. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ] [ Yeşil Versiyon ]
  23. Rappoport, D.; Morzaev, D.; Weiss, S.; Vieyra, M.; Nicholson, JD; Leiba, H.; Goldenberg-Cohen, N. Optik Sinir Ezilmesinin Fare Modelinde İntravitreal Bevacizumab Enjeksiyonunun Optik Sinir Başı Sızıntısı ve Retinal Ganglion Hücresi Sağkalımına Etkisi. Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2013 , 54 , 8160–8171. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ PubMed ] [ Yeşil Versiyon ]
  24. Novitzky, I.; Marianayagam, NJ; Weiss, S.; Muhsinoğlu, O.; Fridman, M.; Leibovitch, TA; Goldenberg-Cohen, N.; Michowiz, S. Fare Modelinde İnme İndüksiyonunu takiben Bevacizumab ve Sildenafil’in Nöroprotektif Etkisinin Karşılaştırılması. BioMed Arş. Uluslararası 2016 , 2016 , 3938523. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  25. Goldenberg-Cohen, N.; Guo, Y.; Margolis, F.; Cohen, Y.; Miller, NR; Bernstein, SL Deneysel Ön Optik Sinir İskemisinin İndüksiyonundan Sonra Oligodendrosit Disfonksiyonu. Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2005 , 46 , 2716–2725. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  26. Zahavi, A.; Weiss, S.; Vieyra, M.; Nicholson, JD; Muhsinoğlu, O.; Barinfeld, O.; Zadok, D.; Goldenberg-Cohen, N. Saf Farelerde Sildenafil’in Oküler Etkileri ve Optik Sinir Ezilmesinin Fare Modeli. Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2019 , 60 , 1987–1995. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  27. Valentim, CC; Singh, RP; Du, W.; Moini, H.; Talcott, KE VISTA ve VIVID’de İntravitreal Aflibercept Enjeksiyonu veya Lazer ile Tedaviden Sonra Diyabetik Maküler Ödemin Çözülmesine Kadar Geçen Süre. Oftalmol. Retin. 2022; Basında. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  28. Gerhardinger, C.; Costa, MB; Coulombe, MC; Toth, I.; Hoehn, T.; Grosu, P. Diyabette Retinal Muller Hücrelerinde Akut Faz Yanıt Proteinlerinin İfadesi. Araştır. Oftalmoloji Vis. Bilim. 2005 , 46 , 349–357. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
  29. Olivares, AM; Althoff, K.; Chen, GF; Wu, S.; Morrisson, MA; DeAngelis, MM; Haider, N. Diyabetik Retinopatinin Hayvan Modelleri. Curr. Diyabet Temsilcisi 2017 , 17 , 93. [ Google Akademik ] [ CrossRef ] [ Yeşil Versiyon ]
  30. Shaw, SG; Boden, JP; Biecker, E.; Reichen, J.; Rothen, B. Endotelin antagonizması NOD farelerinde diyabetik retinopatiyi önler: Anjiyojenik faktör adrenomedullinin potansiyel bir rolü. Tecrübe. Biyol. Med. 2006 , 231 , 1101–1105. [ Google Akademik ]
  31. Li, C.-R.; Güneş, S.-G. NOD fare retinasında VEGF ekspresyonu ve hücre apoptozu. Uluslararası J. Oftalmol. 2010 , 3 , 224–227. [ Google Akademik ] [ CrossRef ]
Paylaş

Op. Dr. Orkun Muhsinoğlu

Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Mezunu TAU Rabin Tıp Merkezi'nde Göz İhtisası Maltepe Üni. Göz Hast. Anabilim Dalı'nda Öğretim Üyeliği Tarsus Devlet Hastanesi'nde görev yapmaktadır

Yorum bırakın

E-posta adresiniz yayınlanmayacak. Gerekli alanlar * ile işaretlenmişlerdir